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做ELISA确定抗原**佳包被浓度，做方阵滴定具体怎么做呢？选择好一份已知为阳性和阴性背景的标本，将你的抗原用1*CBPH=*PBPH=（8个条件）后加入96孔板每孔100ul。（一般包被浓度100ng抗原或抗体/孔，**优包被条件需进行试验选择）4度过夜取出后甩干，加入20%NBS封闭每孔200ul。37度2h热封，甩去后拍干即可。将你HRP或AP标记的抗原或二抗用酶标稀释液进行稀释（倍比稀释4个梯度）即可。棋盘滴定就是板酶交叉,同时带上阳性、阴性通过试验确定**佳P/N的包被搭配E的试验2．抗原和抗体**佳工作浓度的确定?抗原抗体反应要求在**适比例条件下进行，ELISA反应试剂多，其工作浓度不同对结果影响较大，因此必须对包被抗原(抗体)和酶标抗体(抗原)进行**佳工作浓度的滴定和选择，以达到**佳的测定条件。?1）方阵(棋盘)滴定法选择包被抗原的工作浓度用包被液将抗原作一系列稀释。如果加入的酸或碱量过多，缓冲溶液的缓冲能力会降低，pH值会发生变化。中国香港有酚红缓冲液包括

    从中选取包被抗体浓度和酶标抗体的稀释度。为了进一步节省试剂，可以此浓度为基点，缩小间距再进一步做棋盘滴定。?2测定方法的标准化?2．1加样?????ELISA中除了包被外，一般需进行96孔加样。定性测定中有时不强调加样量的准确性。例如规定为加样1滴，如不具备相当的条件，要尽量使用相同口径的滴管，保持准确的加样姿势，使每滴液体的体积基本相同。在定量测定中，加样量应力求准确，**好采用量程准确的微量移液器。加样时应将液体加在孔底，不要加在孔壁上部，避免出现气泡。?2．2保温?????在ELISA中，一般在加标本和结合物后，反应的温度和时间应按规定的要求，保温容器**好是水浴箱，可使温度迅速平衡。各ELISA板不应叠在一起。为避免蒸发，板上应加盖，或将板平放在底部垫有湿纱布的湿盒中。如用保温箱，空湿盒应预先放在其，以平衡温度。?2．3洗涤?????洗涤在ELISA过程中不是反应步骤，但却是决定实验成败的关键。在标本和结合物的稀释液和洗涤液中加入聚山梨酯一类物质即避免非特异性吸附，在ELISA中**为常用。ELISA板的洗涤一般可采用以下方法：吸干孑L内反应液；将洗涤液注满板孔；发表评论请自觉遵守互联网相关的政策法规，严禁发布***、**、反动的言论。浙江缓冲液介绍PBS溶液一般指磷酸缓冲盐溶液,不可以喝。

缓冲溶液的pH通常由酸的电离平衡常数Ka及盐和酸的浓度以及所在的环境、温度等因素来决定；4.75~7.25属于正常ph范围内。缓冲溶液是由弱酸及其盐、弱碱及其盐组成的混合溶液，能在一定程度上抵消、减轻外加强酸或强碱对溶液酸碱度的影响，从而保持溶液的pH值相对稳定。缓冲溶液的pH值在一定的范围内不因稀释或外加少量的酸或碱而发生***的变化，缓冲溶液依据共轭酸碱对及其物质的量不同而具有不同的pH值和缓冲容量。1、酸和盐浓度等比例增减时，溶液的pH值不变。2、酸和盐浓度相等时，缓冲液的缓冲效率为比较高，比例相差越大，缓冲效率越低。

PBS缓冲液的性质和优点4.无毒性：PBS缓冲液是一种非常安全的缓冲液，对生物样品和细胞没有毒性。5.维持稳定性：PBS缓冲液能够维持生物样品的稳定性，防止样品的变性和降解。6.pH稳定：PBS缓冲液的pH值一般在7.2-7.4之间，非常适合细胞和生物样品的生长和保存。7.离子平衡：PBS缓冲液中的适当离子浓度可以提供细胞所需的离子环境，维持细胞的正常生理功能。8.易于制备：PBS缓冲液的制备非常简单，只需要将磷酸盐和盐溶解在适量的水中即可。长时间或过量使用PBS缓冲液可能会对人体产生耐受性,导致恶心、呕吐、腹泻等症状。

PH计校正的标准缓冲液有几种？

ph计校正常用的三种标准溶液：pH分别为4.0、7.0和10.0一般4.0的可以用邻苯二甲酸氢钾体系配制，7.0的用磷酸二氢钾-磷酸氢二钠体系配制，10.0的用碳酸钠-碳酸氢钠体系配制，可以根据需要的缓冲容量确定浓度。校正pH计所用工具和原料：标准缓冲液（应选择与供试液pH值接近的标准缓冲液），目前标准溶液有7种，在我国一般使用以下3种溶液：(pH值在25℃时)1)邻苯二甲酸氢钾(KHC8H4O4)pH4.003；0.05M2)混合磷酸盐(Na2HPO4)：磷酸二氢钾和磷酸氢二钠混合盐溶液pH6.864；0.025M3)硼砂(Na2B4O7·l0H2O)pH9.182；0.01M 在‌酶活性实验中，‌缓冲液的主要作用是‌维持实验环境的pH稳定‌。浙江缓冲液介绍

由弱酸及其盐组合一起使具有缓冲作用。中国香港有酚红缓冲液包括

实验室使用缓冲液时的pH计或酸度计调校方法：1、在对缓冲液使用pH计进行校正时，需要调整仪器的斜率，并将电极上部的橡胶塞拨开，将小孔暴露在外。否则，在校正过程中会产生负压，导致溶液无法正常进行离子交换，从而使测量数据不准确。2、将电极从烧杯中取出，用滤纸将未干的水分吸干，然后将其放入装有混合磷酸盆的烧杯中，等待大约15分钟，然后进行仪器的调整，设定基准点。3、然后将电极放入装有KHC8H4O4或硼砂溶液的容器中，等待15分钟后，观察仪器显示的pH数值。4、校正完成后，将橡胶塞放回原位。如果暂时不使用pH计，一定要保护好它，将其放入保护套中，以延长其寿命。此外，需要注意的是pH计属于易碎品，需要轻拿轻放。

手持式缓冲液pH计的校准方法：在温度为25度的条件下，将测试电极插入pH值为6.86的混合磷酸盐标准缓冲液中，并缓慢转动电极。可以稍微调整校正电位器，直到显示器上的数值与标准缓冲溶液的pH值相同。如果将电极插入其他缓冲溶液中，如pH值为4.01的C8H5KO4或pH为9.18的硼砂标准缓冲溶液中，显示的数值与缓冲液的pH值允许有一定误差，但误差应在参考值范围内。 中国香港有酚红缓冲液包括